實驗結果這麽難重複，怎樣才能(néng)提高重複性呢(ne)？

剛開始做實驗的時候，有(yǒu)一次發現一篇文(wén)章所用(yòng)的細胞，處理(lǐ)藥物(wù)和我現在的課題一模一樣。那麽我想用(yòng)文(wén)章中(zhōng)的處理(lǐ)時間及濃度是不是可(kě)以做出來同樣的結果？當時已經很(hěn)晚了，看我還沒走，一個前輩問我怎麽還不回去。我說我正在重複一篇文(wén)章中(zhōng)的實驗，這時她意味深長(cháng)的說了一句話：“重複别人的實驗？有(yǒu)時候你連自己做過的實驗可(kě)能(néng)都重複不出來！當時我聽後不以為(wèi)然，心想：怎麽可(kě)能(néng)連自己的實驗都重複不出來？那肯定是自己的實驗水平有(yǒu)問題呗。工(gōng)作(zuò)之後作(zuò)為(wèi)技(jì )術支持常接聽客戶咨詢電(diàn)話，有(yǒu)客戶會電(diàn)話進來表示實驗結果無法重複：即使用(yòng)同樣的樣本、同樣的抗體(tǐ)，昨天可(kě)以做出來了，今天卻沒有(yǒu)條帶。有(yǒu)時候是抗體(tǐ)批次問題，換了個批次實驗就無法重複了。不僅我們普通實驗者，一些學(xué)術權威們也有(yǒu)這樣的困惑：耶魯大學(xué)某著名(míng)的病理(lǐ)學(xué)家曾用(yòng)抗體(tǐ)開發了一個黑色素瘤治療的診斷試劑。但花(huā)費了大量的時間和金錢後，卻發現新(xīn)的抗體(tǐ)無法重複之前的結果，原來這個抗體(tǐ)特異性存在問題，隻能(néng)被迫停止了這個項目。因此近幾年來，很(hěn)多(duō)學(xué)者都紛紛認為(wèi)應該重視起抗體(tǐ)的問題，同時也要求抗體(tǐ)行業進行自我約束。

為(wèi)什麽實驗結果很(hěn)難重複呢(ne)？主要有(yǒu)5個方面的原因：1、參考文(wén)獻；2、生産(chǎn)商(shāng)；3、經銷商(shāng)；4、搜索引擎；5、同行審閱。下面讓我們具(jù)體(tǐ)來看下這5個方面以及如何解決這幾方面帶來的困擾。

1、參考文(wén)獻：是我們選擇抗體(tǐ)的主要方式。當我們選擇抗體(tǐ)的時候，最常用(yòng)的方法是聽取同行的推薦或者查閱參考文(wén)獻，看看别人用(yòng)了什麽得到了滿意的實驗結果。但是通常會遇到2個問題：當你用(yòng)搜索引擎去搜尋抗體(tǐ)時，發現有(yǒu)的文(wén)章并沒有(yǒu)标明使用(yòng)的哪個抗體(tǐ)；或者所查文(wén)獻标注使用(yòng)了另一參考文(wén)獻的抗體(tǐ)，你又(yòu)進一步查閱­­——找了半天，卻發現最初的那個作(zuò)者并沒有(yǒu)标明到底用(yòng)了具(jù)體(tǐ)哪個抗體(tǐ)。所以有(yǒu)的參考文(wén)獻的缺點就是沒有(yǒu)抗體(tǐ)的具(jù)體(tǐ)信息。

在這種背景下，我們需要選擇性地參考參考文(wén)獻。一個簡單粗暴的方法，就是選擇那些影響因子比較高的文(wén)章，比如大于5分(fēn)，可(kě)以在一定程度上保證當你Follow别人的實驗步驟時，有(yǒu)更大的可(kě)能(néng)重複出來；也可(kě)以選擇那些标注了抗體(tǐ)貨号、稀釋比例和生産(chǎn)廠家的文(wén)章，減少反複試驗各種抗體(tǐ)的時間。

2、用(yòng)生産(chǎn)商(shāng)的網站：有(yǒu)些公(gōng)司号稱生産(chǎn)商(shāng)，但是卻隻生産(chǎn)極少量的抗體(tǐ)，絕大部分(fēn)抗體(tǐ)是從其他(tā)公(gōng)司OEM過來的，因此質(zhì)量參差不齊。有(yǒu)些公(gōng)司不告訴客戶怎麽驗證抗體(tǐ)，而讓用(yòng)戶自己去檢測。有(yǒu)些公(gōng)司雖然秀了數據，但是這些數據卻非常有(yǒu)限，僅僅是告訴你這個抗體(tǐ)可(kě)以用(yòng)于何種應用(yòng)，并沒有(yǒu)說明到底檢測的是什麽？是否有(yǒu)交叉反應？往往我們抱怨比較多(duō)的是這些公(gōng)司不提供完整的驗證抗體(tǐ)的數據，批次質(zhì)量不穩定。

作(zuò)為(wèi)研究人員，一定要選擇重視抗體(tǐ)質(zhì)量的真正的生産(chǎn)商(shāng)。CST一直以為(wèi)科(kē)研人員提供最高質(zhì)量的抗體(tǐ)作(zuò)為(wèi)使命，在生産(chǎn)過程中(zhōng)非常重視抗體(tǐ)特異性、靈敏度、批次間一緻性的檢測，并将驗證數據公(gōng)布在網站上，對于大家選擇抗體(tǐ)非常有(yǒu)幫助。有(yǒu)些未公(gōng)布的驗證失敗的數據，如果研究人員問詢，CST的研發科(kē)學(xué)家都非常樂意分(fēn)享。這就是為(wèi)什麽CST能(néng)夠屢次獲得“最佳抗體(tǐ)”、“最有(yǒu)用(yòng)的網站”、“最佳客戶服務(wù)”、“研究者的首選抗體(tǐ)”、“五個第一”等殊榮的原因。

選擇一個靠譜的廠家至關重要，其實從廠家所提供的産(chǎn)品說明書的詳細程度就可(kě)以來判斷這個廠家是不是可(kě)靠，詳細并不是說篇幅越長(cháng)越好，而是看實驗種類是不是經過驗證，有(yǒu)沒有(yǒu)提供實驗所需要的詳細試劑。CST所有(yǒu)的抗體(tǐ)都是經過嚴格篩選和驗證的，實驗步驟都是經過優化的，我們希望客戶通過網站就可(kě)以發現更多(duō)産(chǎn)品的相關信息，而且我們花(huā)費了很(hěn)多(duō)時間來優化實驗方法，比如在WB一抗稀釋液這一步，到底是用(yòng)脫脂奶粉稀釋還是BSA稀釋，可(kě)以看說明書下方的紅色方框，可(kě)能(néng)有(yǒu)時候差異不是很(hěn)大，但很(hěn)多(duō)時候差異還是很(hěn)明顯的；在說明書右方也會提到具(jù)體(tǐ)的稀釋比例以及稀釋buffer，比如IHC到底是用(yòng)檸檬酸鹽修複還是EDTA修複，在說明書上都可(kě)以看到，同時我們也有(yǒu)很(hěn)多(duō)小(xiǎo)冊子，像WB成功實驗指南，IHC實驗成功指南等等，而且還會檢測每一個批号，确保新(xīn)的批号和舊的批号是一樣的實驗結果，對抗體(tǐ)的靈敏度、 特異性、反應性、穩定性方面都會做相關的測試。

3、經銷商(shāng)：當今科(kē)研市場，供應商(shāng)的競争十分(fēn)激烈，非正規的供應商(shāng)如果想走出一條活路，即使它沒有(yǒu)任何生産(chǎn)商(shāng)的授權，也會轉賣很(hěn)多(duō)公(gōng)司的産(chǎn)品。有(yǒu)的供應商(shāng)缺乏專業的技(jì )術人員，對産(chǎn)品本身不了解，不能(néng)給客戶做出專業的正确的推薦；非正規的供應商(shāng)經常從大的供應商(shāng)那裏買來抗體(tǐ)，分(fēn)裝(zhuāng)後重新(xīn)貼上标簽進行銷售；有(yǒu)的供應商(shāng)甚至直接出售假貨、以次充好，把産(chǎn)品拿(ná)過來分(fēn)裝(zhuāng)然後貼上知名(míng)産(chǎn)品的标簽。因為(wèi)整個市場不透明，導緻用(yòng)戶所看到的産(chǎn)品信息，并不等同于生産(chǎn)商(shāng)所提供的信息，最終導緻科(kē)研人員買到質(zhì)量很(hěn)差的産(chǎn)品甚至假貨。

作(zuò)為(wèi)研究人員，一定要擦亮眼睛，盡可(kě)能(néng)從生産(chǎn)商(shāng)授權的代理(lǐ)商(shāng)處購(gòu)買。授權代理(lǐ)商(shāng)可(kě)以從生産(chǎn)商(shāng)的網站上查詢得到，也可(kě)以直接打電(diàn)話給生産(chǎn)商(shāng)詢問。詢問實驗室的老師和管理(lǐ)人員，尋找長(cháng)期合作(zuò)的可(kě)靠的代理(lǐ)商(shāng)。點擊此處查看CST 授權代理(lǐ)商(shāng)。

4、第三方産(chǎn)品平台網站，比如CiteAb， Biocompare等，其實很(hěn)多(duō)産(chǎn)品都是不斷更新(xīn)的。排名(míng)最靠前，引用(yòng)文(wén)獻最多(duō)的并不一定是這個供應商(shāng)最好的産(chǎn)品，而僅僅是生産(chǎn)最久的産(chǎn)品。

因此，除了看引用(yòng)文(wén)獻最多(duō)的産(chǎn)品，還可(kě)以在平台通過關鍵詞搜索，查看符合條件的多(duō)個産(chǎn)品，結合生産(chǎn)商(shāng)網站上提供的驗證數據等進行綜合考量。就抗體(tǐ)而言，實驗多(duō)檢測來自于人、小(xiǎo)鼠、大鼠的樣本，作(zuò)為(wèi)來自于更遠(yuǎn)源種屬的兔單抗，其特異性和靈敏度更好，可(kě)優先選擇。

5、同行審閱。往往發表文(wén)章的時候，不需要提供詳細的操作(zuò)方法及全部的驗證數據。可(kě)能(néng)有(yǒu)些已發表的實驗結果并沒有(yǒu)做3-5次的重複試驗，或者做了之後隻是挑選了一幅滿意的圖片。

如果同行審閱們有(yǒu)更加嚴格的評審标準，比如讓用(yòng)戶盡可(kě)能(néng)的提供詳細的産(chǎn)品貨号、稀釋比例及試驗步驟，或者有(yǒu)一個專門的網頁(yè)來上傳所有(yǒu)的原始圖片（用(yòng)戶可(kě)以參考各出版社的網站，排版說明都有(yǒu)不同的要求，有(yǒu)些雜志(zhì)還會有(yǒu)專門的網頁(yè)來存放這些圖片）供他(tā)人參考，不僅會促使整個學(xué)術界形成一種好的風氣，也會減少實驗不可(kě)重複、造假等問題。

CST作(zuò)為(wèi)世界領先的抗體(tǐ)生産(chǎn)商(shāng)，我們會一如既往地重視出廠前的抗體(tǐ)驗證，即特異性、靈敏度、批次間一次性的檢驗，研發生産(chǎn)抗體(tǐ)的科(kē)學(xué)家為(wèi)大家提供最專業的技(jì )術支持，網站提供海量的驗證數據和信号通路、Phosphosite蛋白修飾數據庫等學(xué)術資源，為(wèi)實驗的重複性貢獻我們的專業力量。我們的口号是“不要讓抗體(tǐ)成為(wèi)您實驗的變量”，讓多(duō)方努力，共同提高整個試劑行業的可(kě)重複性。

除了上述這幾個宏觀方面，實驗重複性差還有(yǒu)其他(tā)方面的原因。如研究人員沒有(yǒu)嚴格遵循生産(chǎn)商(shāng)的操作(zuò)步驟，或者随意改變實驗系統，使實驗變量增加。因此說，除了要有(yǒu)質(zhì)量非常可(kě)靠的抗體(tǐ)，還需遵循生産(chǎn)商(shāng)的操作(zuò)步驟，選擇合适的模型，客戶的真實反饋等其他(tā)方面也同等重要，後續請繼續關注我們的文(wén)章，看看如何從微觀方面來提高實驗的可(kě)重複性。