本期為(wèi)大家帶來血清和其他(tā)細胞培養試劑常見問題，滿滿的幹貨，務(wù)必仔細閱讀啦

⚑ 正常情況下，融化後血清的外觀顔色應該是？

血清為(wèi)動物(wù)來源，成分(fēn)複雜，不同批次間會存在一些外觀上的差别。一般情況下，它們的顔色可(kě)能(néng)是金黃色、紅色、琥珀棕色或者是介于三者之間。

⚑ 血清應如何保存？

未拆封的血清應存放于-15至-20℃，避免反複凍融。拆封後的血清應無菌分(fēn)裝(zhuāng)成一次的用(yòng)量并存放于-15至-20℃，在産(chǎn)品質(zhì)量證書标識的效期内均可(kě)使用(yòng)。2-8℃溶解後建議盡快使用(yòng)。

⚑ 血清的有(yǒu)效期是多(duō)久？

大部分(fēn)康甯血清效期是5年，針對每個批次，請通過質(zhì)檢文(wén)件确定具(jù)體(tǐ)效期日期。

質(zhì)檢文(wén)件下載地址：http://www.corning.com/worldwide/en/products/life-sciences/resource-library.html

⚑ 血清應如何融解？

從冰箱中(zhōng)取出血清，放于2-8℃融化，融化過程中(zhōng)不時旋轉（swirling mix）混勻。充分(fēn)融解後分(fēn)裝(zhuāng)或平衡到室溫後使用(yòng)

⚑ 為(wèi)什麽有(yǒu)時血清中(zhōng)出現絮狀沉澱？是否需要去除？如何去除？

多(duō)種原因可(kě)能(néng)導緻絮狀沉澱的形成，最常見的原因之一是融化過程中(zhōng)，脂蛋白聚集所緻。該現象一般不會影響産(chǎn)品質(zhì)量。可(kě)以400g離心5分(fēn)鍾，取上清，然後過濾。根據需要選擇合适的濾膜孔徑，一般最常用(yòng)的是0.22um PES材質(zhì)的濾膜。為(wèi)避免濾膜阻塞，建議離心後取上清加入培養基内一起過濾而不是直接過濾血清。

⚑ 為(wèi)什麽存放于冰箱中(zhōng)的血清會出現沉澱？如何避免該現象？

在2-8°C條件下存放，血清中(zhōng)的多(duō)種蛋白或脂蛋白會形成肉眼可(kě)見的沉澱，如血纖蛋白（fibrin），單體(tǐ)時處于溶解狀态，在凍融過程中(zhōng)會發生聚集，形成肉眼可(kě)見的沉澱。但該現象一般不會影響血清的性能(néng)。可(kě)以400g離心5分(fēn)鍾，取上清，然後過濾。根據需要選擇合适的濾膜孔徑，一般最常用(yòng)的是0.22um PES材質(zhì)的濾膜。為(wèi)避免濾膜阻塞，建議離心後取上清加入培養基内一起過濾而不是直接過濾血清。為(wèi)盡量避免出現上述現象，建議血清分(fēn)裝(zhuāng)成一次性用(yòng)量存于-15°至-20℃冰箱，避免反複凍融和融化後的血清在2-8°C條件下長(cháng)時間放置。

⚑ 血清是否需要做滅活處理(lǐ)？

這取決于您的應用(yòng)。

滅活過程中(zhōng)，會導緻血清中(zhōng)某些成分(fēn)被破壞，如氨基酸，維生素，生長(cháng)因子等。所以隻有(yǒu)在您的實驗對血清有(yǒu)特殊要求時，才會考慮對血清進行滅活處理(lǐ)。如您的實驗對血清中(zhōng)的某種組分(fēn)敏感，需要去除該組分(fēn)。最常見的情況是需要去除血清中(zhōng)的補體(tǐ)蛋白，因為(wèi)補體(tǐ)在機體(tǐ)中(zhōng)參與細胞殺傷，巨噬細胞和淋巴細胞活化，肥大細胞和血小(xiǎo)闆組胺釋放，平滑肌收縮等過程，所以一般在免疫學(xué)相關研究中(zhōng)及肌細胞和幹細胞的培養過程中(zhōng)需要對血清進行滅活處理(lǐ)。

⚑ 如何進行血清滅活處理(lǐ)？

血清請先按上述“血清應如何融解”中(zhōng)的操作(zuò)步驟融化和混勻，熱滅活時請将血清置于56℃水浴30分(fēn)鍾。為(wèi)盡量減少熱滅活對血清品質(zhì)的影響，一次滅活的血清體(tǐ)積不宜過大。最好準備同樣的容器裝(zhuāng)相等體(tǐ)積的水（與血清相同溫度），滅活時将裝(zhuāng)有(yǒu)血清和水的容器同時放入56℃水浴, 在裝(zhuāng)水的容器中(zhōng)放置溫度計，加熱過程中(zhōng)不時輕輕旋轉混勻血清，當溫度計顯示達到56℃左右，開始計時。56 ℃水浴後，建議馬上轉移到冰上降溫。

⚑ 為(wèi)什麽需要對血清進行gamma射線(xiàn)輻照？

gamma 射線(xiàn)輻照的目的是滅活血清中(zhōng)的病毒，一般情況下，25-40kGy和30-45kGy是常用(yòng)的輻射劑量。

⚑ 如何應對血清的批間差？

康甯血清産(chǎn)品通過嚴格的質(zhì)控盡可(kě)能(néng)縮小(xiǎo)批間差，但由于血清本身的特點和來源，無法完全避免批間差。客戶可(kě)以通過做預測試等方式，選擇可(kě)滿足要求的血清批次。

⚑ 如何查詢康甯血清的産(chǎn)地信息？

在相應的産(chǎn)品質(zhì)量證書中(zhōng)包含産(chǎn)地信息（COO）

⚑ 如何獲得康甯血清的TSE/BSE和SDS文(wén)件？

請聯系康甯技(jì )術支持中(zhōng)心

⚑ 什麽情況下需要無Ca²⁺/Mg²⁺離子的PBS？

取決于您的研究應用(yòng)。除了一些Ca²⁺/Mg²⁺會影響實驗結果的實驗以外，一般在胰酶消化前，建議用(yòng)無Ca²⁺/Mg²⁺離子的PBS清洗細胞，因為(wèi)Ca²⁺/Mg²⁺會抑制胰酶活性。若消化後的貼壁細胞需要繼續培養，建議消化後用(yòng)含Ca²⁺/Mg ²⁺的PBS清洗，因為(wèi)Ca²⁺/Mg²⁺有(yǒu)助于細胞的貼壁過程。另外，若需要在緩沖液中(zhōng)長(cháng)時間保存細胞，也推薦使用(yòng)含Ca²⁺/Mg²⁺的PBS。

⚑ 康甯無Ca²⁺/Mg²⁺離子的PBS和DPBS的區(qū)别是什麽？

取決于您的研究應用(yòng)。除了一些Ca²⁺/Mg²⁺會影響實驗結果的實驗以外，一般在胰酶消化前，建議用(yòng)無Ca²⁺/Mg²⁺離子的PBS清洗細胞，因為(wèi)Ca²⁺/Mg²⁺會抑制胰酶活性。若消化後的貼壁細胞需要繼續培養，建議消化後用(yòng)含Ca²⁺/Mg²⁺的PBS清洗，因為(wèi)Ca²⁺/Mg²⁺有(yǒu)助于細胞的貼壁過程。另外，若需要在緩沖液中(zhōng)長(cháng)時間保存細胞，也推薦使用(yòng)含Ca²⁺/Mg²⁺的PBS。

⚑ 康甯是否有(yǒu)注射級别（WFI）的水？

康甯細胞培養用(yòng)水按照USP和/或EP 中(zhōng)對注射用(yòng)水（WFI）的無菌要求進行質(zhì)控，但康甯的該類産(chǎn)品為(wèi)科(kē)研用(yòng)産(chǎn)品，非臨床注射用(yòng)水。

⚑ 用(yòng)于消化的胰酶中(zhōng)加EDTA的原因是什麽？

鈣離子會抑制胰酶活性，EDTA作(zuò)為(wèi)鈣離子螯合劑，可(kě)以去除鈣離子，有(yǒu)助于胰酶更好發揮消化細胞的功能(néng)

⚑ 為(wèi)什麽在使用(yòng)胰酶前要先清洗貼壁細胞？

目前大部分(fēn)情況下，細胞培養液中(zhōng)都含有(yǒu)一定量血清。血清中(zhōng)含有(yǒu)抑制胰酶活性的成分(fēn)，如α1-antitrypsin 和α2-macroglobulin。建議使用(yòng)無鈣鎂離子的緩沖液清洗細胞。